寧波正揚生物病毒檢測注意事項
根據(jù)現(xiàn)有法規(guī)和指導原則可以發(fā)現(xiàn)，RCL病毒檢測方法主要包含指示細胞培養(yǎng)法、ELISA法、PCR/q-PCR法和PERT法。因為指示細胞培養(yǎng)法檢測需28天，并且因為陽性對照病毒的性質，要求其需要在P3或者P2實驗室環(huán)境中進行，致使該方法具有耗時長，環(huán)境要求高的特點。相比而言,基于VSV-G序列的q-PCR方法或基于psi-gag序列的PCR方法，因其具有檢測時間短、環(huán)境條件簡單、靈敏度高和可重復性強等優(yōu)點，被許多CAR-T申報企業(yè)作為快速放行方法。歡迎聯(lián)系重組腺相關病毒檢測。寧波正揚生物病毒檢測注意事項
基因治 療產(chǎn)品是近年來國內外藥物研發(fā)的熱點，通常由各種病毒或非病毒載體攜帶治 療基因組成。在病毒載體中，慢病毒載體(LVs)由于其有效的將基因整合進靶細胞基因組、穩(wěn)定的基因表達等特點，被認為是蕞有希望的基因治 療載體?？紤]到慢病毒對人的病原性及相關的安全性，所使用的慢病毒載體均為復制缺陷型載體，但在病毒載體生產(chǎn)過程中可能由于同源重組或非同源重組導致可復制性慢病毒(RCL)的產(chǎn)生，RCL可以整合到細胞基因組中，從而導致原ai基因激 活，抑ai基因破壞等，因此，這類產(chǎn)品中的復制型慢病毒檢測是安全性檢測中非常重要的項目，美國FDA及中國CDE都要求在生產(chǎn)的整個過程及不同階段都要進行RCL檢測，以確保無RCL的污染。上海重組腺相關病毒檢測常見問題復制型逆轉錄病毒檢測要求有哪些？
美國FDA要求對于采用γ-逆轉錄病毒載體和慢病毒載體的產(chǎn)品，需要在整個生產(chǎn)過程及不同階段進行RCR復制型逆轉錄病毒／RCL復制型慢病毒檢測，針對載體生產(chǎn)用主細胞庫、工作細胞庫、生產(chǎn)終末細胞、載體上清液及在體外培養(yǎng)超過4天的載體轉到細胞進行檢測。針對慢病毒載體使用時RCL的檢測，除了金標準——指示細胞培養(yǎng)法，還需要選擇2種不同原理的快檢方法對其進行補充檢測。RT-PCR法具備操作便捷快速、特異性好、靈敏度高、穩(wěn)定性好等優(yōu)點，是RCR/RCL補充檢測的優(yōu) 選方法。
目前針對RCL復制型慢病毒檢測的方法差異很大，例如，實時定量PCR方法(Q-PCR法)會因為細胞或質粒DNA殘留導致假陽性；合胞體形成測定法需要慢病毒具有完整的能力并且包含Env元件，該方法的靈敏度還未得到驗證；標志物補救測定法尚不清楚來自載體生產(chǎn)過程中的RCL是否會濟活標志物；逆轉錄酶活性測定法(PERT)不能區(qū)分RCL和載體顆粒，且細胞中固有的內源性 病毒顆粒也會影響檢測結果的判斷；細胞培養(yǎng)法檢測時間過長。如您有需要，歡迎聯(lián)系！為什么要做復制型逆轉錄病毒檢測？
RCL復制型慢病毒檢測方法包括以下3種：①ELISA法(p24蛋白測定)：適用于由載體生產(chǎn)過程中病毒基因組之間的重組形成RCL的檢測。但，對于VSV-G包膜質粒和來源于其他病毒的gal-pol基因功能組件之間發(fā)生重組不表達p24蛋白的假型病毒不適用。其優(yōu)點為適用性廣（濃縮載體、終末細胞、血清血漿等多種樣本）、靈敏度高和可定量等。②使用qPCR的方法測定VSV-G基因和PCR方法檢測由病毒載體質粒和包裝質粒重組產(chǎn)生的psi-gag基因序列，具有靈敏度高，可重復性和操作簡單等優(yōu)點。③測定逆轉錄酶活性的方法，它可以用來檢測RCL相關的不同結構的逆轉病毒，缺點為在某些細胞檢測中，存在背景高的現(xiàn)象。慢病毒檢測助力CAR-T細胞醫(yī)治產(chǎn)品質控放行。杭州RCR病毒檢測價格
CAR-T細胞醫(yī)治產(chǎn)品中復制型慢病毒檢測的監(jiān)管要求。寧波正揚生物病毒檢測注意事項
qPCR法RCL/RCR病毒檢測：目前許多CAR-T企業(yè)采用Q-PCR方法直接測定CAR-T終產(chǎn)品中的VSV-G序列或psi-gag序列，因考慮到CAR-T細胞種產(chǎn)品一般需要新鮮輸注的特殊情況，基于細胞培養(yǎng)法的RCL/RCR檢測方法周期較長，建議在細胞產(chǎn)品制備過程中進行多面控制(如對慢病毒載體及生產(chǎn)終末細胞采用基于細胞培養(yǎng)方法測定RCL/RCR，以確保生產(chǎn)工藝過程中不存在RCL的風險)，細胞終產(chǎn)品階段可采用qPCR檢測法快速放行。qPCR法RCL/RCR病毒檢測：目前許多CAR-T企業(yè)采用Q-PCR方法直接測定CAR-T終產(chǎn)品中的VSV-G序列或psi-gag序列，因考慮到CAR-T細胞種產(chǎn)品一般需要新鮮輸注的特殊情況，基于細胞培養(yǎng)法的RCL/RCR檢測方法周期較長，建議在細胞產(chǎn)品制備過程中進行多面控制(如對慢病毒載體及生產(chǎn)終末細胞采用基于細胞培養(yǎng)方法測定RCL/RCR，以確保生產(chǎn)工藝過程中不存在RCL的風險)，細胞終產(chǎn)品階段可采用qPCR檢測法快速放行。。寧波正揚生物病毒檢測注意事項
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